‌一、操作前安全准备‌

‌环境与防护‌

必须在洁净环境（万级背景下的百级超净台/无菌室）操作，提前紫外灭菌≥30分钟并乙醇擦拭台面

操作者需穿戴灭菌服、口罩及手套，手部用75%乙醇消毒后操作

‌设备与耗材检查‌

滤膜选用0.45μm孔径灭菌滤膜（如混合纤维素酯），过滤前后确认无破损

强酸/强碱/强腐蚀性样品禁用，避免损伤仪器管路

🔬 ‌二、样品处理关键点‌

‌液体样品‌

供试液高度不超过过滤杯最大刻度，避免溢出污染14

含抑菌成分样品（如抗生素）需添加中和剂（硫乙醇酸盐）或增加冲洗量至≥100ml

‌含颗粒物样品‌

提前去除不溶性颗粒或悬浮物，防止滤膜堵塞

固体样品需用无菌稀释液制成均匀悬浮液

⚙️ ‌三、过滤过程控制‌

‌参数设置‌

真空压力≤0.03MPa，抽滤速度需稳定（进液管无气泡为宜）

液层高度不足时，通过胶帽泵入冲洗液调节

‌异常处理‌

‌滤膜无液层覆盖‌：立即取下胶帽排气减压

‌过滤速度骤降‌：检查针头堵塞或颗粒物残留，降低转速或预处理样品

🧫 ‌四、滤膜转移与培养‌

‌无菌操作规范‌

用灭菌镊子将滤膜菌面朝上贴于培养基，确保无气泡

转移过程≤15秒，减少空气暴露污染风险8

‌培养条件‌

细菌：30-35℃培养3天；真菌：23-28℃培养5天

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🛠️ ‌五、设备维护与校准‌

‌日常维护‌

每次使用后：75%乙醇冲洗滤杯及管路，121℃高压灭菌20分钟

每月：乙醇消毒抽气管道，检查双芯针头空气过滤器滤膜干燥度

‌定期验证‌

新样品需做方法适用性验证（回收率≥70%）

每季度校准真空压力表及温度传感器

⚡ ‌六、安全警示‌

‌生物污染风险‌

致病菌样本需在生物安全柜内操作，废弃滤膜需121℃灭菌后再处理

‌应急措施‌

强腐蚀液